PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA(PRÁCTICA XL)

06/03/15

FUNDAMENTO:

Se prepara una batería de disoluciones ,a partir de un plasma control normal y se mide TP del plasma control normal no diluido y de cada una de las disoluciones preparadas.

El 100% es el plasma control normal puro y se calcula el porcentaje de todas las disoluciones y con esos datos trazo una curva de calibrado :poniendo en un eje de ordenadas (vertical ) los valores en segundos,de cada una de las disoluciones y en el de abscisas (horizontal )el % de cada uno de ellos.

MATERIAL :  

• 5 tubos de ensayo de plástico.
• Gradilla.
• un rotulador.
• Una prepipeta de seguridad.
• Una pipeta graduada de 2 ml.
• Una pipeta autómatica para poder dispensar 100 y 200 ul.
• puntas de pipeta (amarillas ).
• 6 cubetas de coagulómetro.
• Un coagulómetro.
• 5 trocitos de acero especiales para poner en las cubetas.
• Bata ,guantes ,papel de filtro .

REACTIVOS :

Suero fisiológico al 85 %

Tromboplastina cálcica ( de la casa comercial )

Plasma control normal .

TÉCNICA :

Preparo una batería de disoluciones :

                                          

Plasma control (ul)                 200          200          200        200    200  

Suero fisiologico(ul)                  0          200           400        600    1800

Dilución                                 1/1          1/2            1/3         1/4      1/10

% de actividad                       100            50            33          25       10

Homogeinizo los tubos suavemente con la mezcla anterior.

Los tubos han de ser rotulados con la cuantía de la disolución o con la concentración.

A continuación coloco la tromboplastina en una cubeta y la pongo en el coagulómetro para que se atempere unos 5 minutos.

Deposito en cinco cubetas un trocito de metal en cada una de ellas ,los rotulo a uno con 100,otro 50,33,25 y 10 ,le añado a cada uno 100 ul de la mezcla anterior de la bateria de disoluciones y las pongo el el coagulómetro atemperar 5 minutos.

Después coloco la cubeta  de concentración 100 en la celda de medida ,la tapo y le añado 200 ul de tromboplastina cálcica ,cuando para de medir anoto el resultado ,así con todas las cubetas.

LECTURA DE RESULTADOS :

El TP es el tiempo que transcurre desde que añado la tromboplastina cálcica, hasta que para de medir que es cuando se ha formado el coagulo,lo más correcto es medir 3 veces el TP del plasma control puro y de cada una de sus diluciones y como resultado final la media de los valores.

También se puede construir una curva de actividad con una gráfica :

HOJA DE TRABAJO :

1º¿Con qué se diluye el pool de plasmas normales o el plasma control normal? con suero salino .

2º ¿Qué porcentaje de actividad se asigna a la disolución del plasma control de 1/2 ? 50

3º¿Cuándo se pone en marcha la lectura del coagulómetro ? cuando se le añade tromboplastina cálcica.

4º ¿Qué se anota en el eje de ordenadas ? los valores en segundos .

RESULTADOS OBTENIDOS :

                                                               Tiempo

Plasma control no diluido (100%)                   26,5 seg.

Plasma control diluido 1/2(50%)                      22,1 seg.

Plasma control diluido 1/3(33%)                       0,5  seg.

Plasma control diluido1/4(25)                          26,3 seg.

Plasma control diluido 1/10 (10)                       76,4 seg.