PRUEBA DE MEZCLA CON PLASMA NORMAL(PRÁCTICA XLV)

FUNDAMENTO:

Esta practicase hace cuando el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado.Entonces se supone que el paciente tiene un déficit de algún factor de la vía intrínseca,en los factores VIII,IX,XI o XII.

MATERIAL:

• Un tubo de ensayo de plástico .
• Una gradilla.
• Un baño de agua.
• Un trocito de acero.
• Un rotulador.
• Una prepipeta de 100 ul .            
• Puntas de pipeta (amarillas ).
• Un coagulómetro.
• Bata ,guantes ,papel de filtro.

REACTIVOS :

• Cloruro cálcico.
• Cefalina activada (R 1 APTT).
• Plasma control normal (de David ).

MUESTRA : PPP(de David) y Serican anormal 

TÉCNICA :

•  Cojo el tubo de plástico y le añado 55 ul de PPP y 55 ul de Serican anormal y lo dejo en el baño de agua a 37ºC por 15 minutos.
• Lo saco del baño y le saco con la prepipeta 100ul y lo paso a una cubeta de coagulómetro .
• Le echo el trocito de metal y lo coloco en el coagulómetro y le añado 100 ul de cefalina activada(frasco transparente ) y lo dejo atemperar 2 minutos.
• A continuación lo paso a la celda de medida ,lo tapo con el tapón rojo y le añado 100 ul de cloruro cálcico.
• Y anoto la medida que me da : 80,5 segundos.

LECTURA DE LOS RESULTADOS :

El TTPA es el tiempo transcurrido desde que se le echa el cloruro cálcico hasta que se forma el coagulo de fibrina.

Valores normales : 30-40 segundos.Si es mayor se considera alargado.

El TTPA se determina dos veces , se calcula la cifra media de los dos valores y el valor medio es el resultado de la determinación.

HOJA DE TRABAJO :

1º ¿Cuándo debe hacerse la prueba de mezcla con plasma normal  ?cuando en el plasma problema se determina un TP normal y un TTPA alargado .

2º Si tras la mezcla con plasma normal ,no se corrige el TTPA, ¿qué se debe investigar ?la presencia de un inhibidor de la coagulación (heparina ,PDF,..).

RESULTADOS OBTENIDOS :

Tras la mezcla del plasma problema  anómalo con plasma normal : No se ha corregido.

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS :

La prueba realizada indica :

La presencia de un inhibidor de la coagulación en el plasma anómalo.

DETERMINACIÓN FUNCIONAL DE FIBRINÓGENO (PRÁCTICA XLII)

0 9 /03 /15
FUNDAMENTO :
Según el método de von Clauss ,se basa en en medir el tiempo que tarda un exceso de trombina en degradar a fibrina el fribrinógeno presente en un PPP diluido y en formar el coagulo.
El tiempo que tarda en formarse el coágulo de fibrina depende,de la cantidad inicial de fibrinógeno y es inversamente proporcional a la concentración de esté en el plasma estudiado (fibrinogenemia ).

• MATERIAL :
• Una gradilla.
• 6 tubos de ensayo de plástico. 
• Una prepipeta de seguridad.
• Una pipeta graduada de vidrio de 1 ml , de 5 ml y de 2ml.
• Una pipeta autómatica de 100ul y de 200ml.
• Puntas de pipeta (amarillas ).
• Un rotulador.
• 6 cubetas de coagulómetro.
• Un coagulómetro.
• 6 trocitos de acero para depositar en las cubetas.
• Un bolígrafo .
• Una hoja de papel de tipo logarítmico.
• Bata,guantes ,papel de filtro.

REACTIVOS:

Un kit de fibrinogeno :

-  R 1: es trombina bovina .

- R 2 : es tampón imidazol
-R 3 :solución caolín.

-Control normal coagulation.

MUESTRA:

Plasma pobre en plaquetas (PPP).

TÉCNICA:

1º. Preparo el siguiente cuadro :

                                Tubo: 1        2          3        4         5          6

Dilución del calibrador      1/40     1/30     1/20     1/10    1/5      1/10       

Muestra PPP (ul)                  0         0        0        0         0          50

Tampón imidazol (ml)       3,9      2,9     1,9       0,9    0 ,4      (450 ul)


Control normal (ul)           100      100     100     100    100          0
coagulation

---------------------------------------------------------------------------------------------------------------------

Despues cojo 6 cubetas de coagulómetro y las rotulo:              1      2       3          4        5       6.
                                                                                       _______________________________
                                           Solución anterior (ul) :             200   200    200     200    200    200
                                                      R 3(ul ) :                       20    20      20       20     20      20       

2º Deposito las cubetas en el coagulometro le añado un trocito de metal a cada una y las dejo atemperar 5 minutos.

3º Pongo la cubeta en la celda de medida ,le coloco el tapóm rojo y le añado 100ul de R1 (el R1 NO SE ATEMPERA )

4º Anoto las medidas :  las medidas no han salido bien

LECTURA DE LOS RESULTADOS .

Si el resultado final es mayor de 40 segundos,la fibrinogenemia es muy baja,se repite la determinación pero a una dilución de 1/5 (100 ul de muestra y 400 ul de tampón veronal ) y el resultado dividirlo por 2.

Despues para trazar la fibrinogenemia se traza una curva  de calibración o de referencia,en vertical los segundos y en horizontal  las concentraciones de fibrinógeno y se dibuja la resta.

La fibrinogenemia normal : 150 y 450 segundos.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS :

La concentración de fibrinogeno puede estar disminuida en trastornos congenitos (afibrinogenemia congénita) o adquiridos(hepatopatías ).

Y asciende en en multitud de procesos inflamatorios.

HOJA DE TRABAJO :

1º ¿De qué tipo es la determinación de fibrinógeno realizada en esta práctica?

2º ¿A qué concentración está la trombina bovina ? 100%

3 º ¿A qué dilución se somete a la muestra ? 1 /10

4º ¿Cuál es la fibrinogenemia normal ?  entre 150 -450 segundos.

 GRÁFICA :

PREPARACIÓN DE UNA CURVA DE ACTIVIDAD DE LA PROTROMBINA(PRÁCTICA XL)

06/03/15

FUNDAMENTO:

Se prepara una batería de disoluciones ,a partir de un plasma control normal y se mide TP del plasma control normal no diluido y de cada una de las disoluciones preparadas.

El 100% es el plasma control normal puro y se calcula el porcentaje de todas las disoluciones y con esos datos trazo una curva de calibrado :poniendo en un eje de ordenadas (vertical ) los valores en segundos,de cada una de las disoluciones y en el de abscisas (horizontal )el % de cada uno de ellos.

MATERIAL :  

• 5 tubos de ensayo de plástico.
• Gradilla.
• un rotulador.
• Una prepipeta de seguridad.
• Una pipeta graduada de 2 ml.
• Una pipeta autómatica para poder dispensar 100 y 200 ul.
• puntas de pipeta (amarillas ).
• 6 cubetas de coagulómetro.
• Un coagulómetro.
• 5 trocitos de acero especiales para poner en las cubetas.
• Bata ,guantes ,papel de filtro .

REACTIVOS :

Suero fisiológico al 85 %

Tromboplastina cálcica ( de la casa comercial )

Plasma control normal .

TÉCNICA :

Preparo una batería de disoluciones :

                                          

Plasma control (ul)                 200          200          200        200    200  

Suero fisiologico(ul)                  0          200           400        600    1800

Dilución                                 1/1          1/2            1/3         1/4      1/10

% de actividad                       100            50            33          25       10

Homogeinizo los tubos suavemente con la mezcla anterior.

Los tubos han de ser rotulados con la cuantía de la disolución o con la concentración.

A continuación coloco la tromboplastina en una cubeta y la pongo en el coagulómetro para que se atempere unos 5 minutos.

Deposito en cinco cubetas un trocito de metal en cada una de ellas ,los rotulo a uno con 100,otro 50,33,25 y 10 ,le añado a cada uno 100 ul de la mezcla anterior de la bateria de disoluciones y las pongo el el coagulómetro atemperar 5 minutos.

Después coloco la cubeta  de concentración 100 en la celda de medida ,la tapo y le añado 200 ul de tromboplastina cálcica ,cuando para de medir anoto el resultado ,así con todas las cubetas.

LECTURA DE RESULTADOS :

El TP es el tiempo que transcurre desde que añado la tromboplastina cálcica, hasta que para de medir que es cuando se ha formado el coagulo,lo más correcto es medir 3 veces el TP del plasma control puro y de cada una de sus diluciones y como resultado final la media de los valores.

También se puede construir una curva de actividad con una gráfica :

HOJA DE TRABAJO :

1º¿Con qué se diluye el pool de plasmas normales o el plasma control normal? con suero salino .

2º ¿Qué porcentaje de actividad se asigna a la disolución del plasma control de 1/2 ? 50

3º¿Cuándo se pone en marcha la lectura del coagulómetro ? cuando se le añade tromboplastina cálcica.

4º ¿Qué se anota en el eje de ordenadas ? los valores en segundos .

RESULTADOS OBTENIDOS :

                                                               Tiempo

Plasma control no diluido (100%)                   26,5 seg.

Plasma control diluido 1/2(50%)                      22,1 seg.

Plasma control diluido 1/3(33%)                       0,5  seg.

Plasma control diluido1/4(25)                          26,3 seg.

Plasma control diluido 1/10 (10)                       76,4 seg.

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE PROTROMBINA(TP) (PRÁCTICA XLI)

05/03/15

FUNDAMENTO:

Para hacer esta prueba se necesita una mezcla de tromboplastina hística y calcio por lo que recibe el nombre de trombolastina cálcica.

La TH procede de cerebro o de pulmón,de hombre o de animal(conejo o vaca).

MATERIAL :

• 2 cubetas de coagulómetro.
• Un trocito de acero para depositar en la cubeta.
• Rotulador .
• Una pipeta automática capaz de dispensar 100 y 200 ul.
• 2 puntas de pipeta  amarillas.
• Un coagulómetro.
• Gradilla.
• Bata ,guantes,papel de filtro liso.

REACTIVOS :

• Tromboplastina cálcica(PT)(R)(pongo la máquina en PTT).

Todos los reactivos de las casas comerciales se comparan con un Índice de Sensibilidad Internacional(ISI).Cuanto menor es el (ISI) de la  TH comercial ,mayor es su sensibilidad.

MUESTRA :

Plasma pobre en plaquetas (PPP),correctamente preparado .

TÉCNICA :

• Cojo el reactivo y lo atempero en la máquina (coagulómetro ) unos 5 minutos.
• Introduzco un trocito de acero en la cubeta de la muestra y le pongo 100 ul y lo atempero en la máquina.
• Coloco la cubeta de la muestra en la celda de medida del coagulómetro ,la tapo con el tapón rojo y le añado el reactivo 200 ul,al agregar la trombolastina cálcica ,se pone en marcha el magnetizador del coagulómetro y comienza la lectura de esté ,cuando para ,es por que ya se ha formado el coagulo.
• LECTURA DE LOS RESULTADOS :

TP de la muestra = 37,2 segundos.

El resultado se puede dar también en forma de porcentaje y se calcula con la siguiente fórmula :

INR= TPdel plasma del paciente/ TP de un plasma control normal ISI

Los valores normales del TP :11-15 segundos.

La ratio de protrombina normal está entre 0,9 y 1,15 .

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS :

El tiempo de protrombina está alargado,el porcentaje de actividad de la protrombina está disminuido y la ratio de protrombina está aumentada , en pacientes con déficits de factores de la vía extrínseca , en enfermos sometidos con dicumarinas y en pacientes que sufren transtornos hépaticos .

HOJA DE TRABAJO :

1º¿Qué índice expresa la sensibilidad de una tromboplastina hística ? (ISI) Índice de Sensibilidad Internacional.

2º¿Cómo se llama la ratio de protrombina corregida ?(INR) Razon Normalizado Internacional.

3º ¿Cuál es el % normal de actividad de la protrombina ? entre 70 y 100 %

4º¿E n qué circunstancias se altera el TP ?en déficts de factores de la vía extrínseaca,en enfermos sometidos a terapias con dicumarinas y en personas que sufren transtornso hépaticos.

RESULTADOS OBTENIDOS :

• TP de la muestra en segundos :37,2 seg.
• % de la actividad de la protrombina contenida en la muestra,obtenido mediante interpolación en la curva de actividad preparada previamente :
• TP del plasma control normal no diluido (el de 100% de actividad): 12,3
• Ratio entre el TP de la muestra y el TP del control : 1,32
• ISI de la tromboplastina hística utilizada : 1,24( de la casa comercial ).
• INR :

RESULTADOS OBTENIDOS:

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS :

  La muestra  ensayada tiene un TP :   alargado.

PRUEBA DE RUMPEL-LEEDE(PRÁCTICA XXXVI)

5/3 /15

FUNDAMENTO:

Aplicar un torniquete,durante un tiempo determinado.Esto hace que aumente la presión intracapilar y una anoxia y hace posible la producción de extravasaciones sanguíneas y puedan aparecer petequias.

MATERIAL :

• Rotulador.
• Esfingmomatonómetro.
• Fonendoscopio.
• Un reloj.
• Bata,guantes.

TÉCNICA:

1º Mido la presión arterial y calculo la media entre la presión arterial sistólica y la diastólica: 120 de alta + 70 de mínima /2 = 95
2º Dibujo un circulo de unos 5 cm de diámetro ,en la cara anterior del antebrazo elegido .
3ºPongo el manguito del esfigmomanómetro en el brazo,insuflo aire hasta ejercer una presión sobre el brazo equivalente a la media del enfermo,que previamente se la ha tomado: 95
4º Mantener esa presión 5 minutos.
5º Aflojo y retiro el manguito.
6º Y cuento el número de petequias que han aparecido en el circulo.
LECTURA DE RESULTADOS :
No ha aparecido ninguna.
Las petequias son pequeñas manchas cútaneas de color rojo ,son acumulos de sangre y no desaparecen cuando cuando se ejerce compresión con un dedo sobre ellas.

El resultado es negativo cuando hay menos de 10 petequias dentro  del circulo ,es dudoso cuando hay de 10-20 y positivo más de 20 .

Si aparecen numerosas petequias en el antebrazo ,la prueba el dedilmente positiva ;en zonas de la extremidad superio ,es medianamente positiva y si las petequias tienden a confluir ,la prueba es fuertemente positiva.

INTREPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS:
La prueba de Rumpel-Leede positiva ,cuando hay un ascenso de la fragilidad capilar ,en las trombocitopenias,en la enfermedad de von Willebrand ,en el escorbuto y en las púrpuras vasculares.

HOJA DE TRABAJO :
1º ¿Cuanto tiempo se deja puesto el esfigmomanómetro en esta prueba ? 5 minutos.
2º ¿Cómo se aprecian las petequias ? pequeñas manchas cutáneas de color rojizo.
3º ¿Cuántas petequias debe contener el círculo para que el resultado sea claramente positivo ?más de20.
4º¿En qué enfermedades hay una prueba de Rumpel-Leede positiva ? en las trombocitopenias,en la enfermedad de von Willebrand ,en el escorbuto y en las púrpuras vasculares.
RESULTADO OBTENIDO :
El numero de petequias aparecidas dentro del círculo es : menor de 10.
¿Han aparecido petequias fuera de la cara anterior del antebrazo ? no
¿Tiende a confluir las petequias ? no

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS :
El resultado de la prueba es : negativo
¿Tiene el paciente una fragilidad capilar aumentada ? no

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE TROMBOPLASTINA PARCIAL ACTIVADA (TTPA)(PRÁCTICA XXXIX)

4/4/15 (PTT en ingles )

MATERIAL :

• Gradilla.
• Un coagulómetro.
• 2 cubetas de coagulómetro.
• Pipeta automática de 0,1 ml
• 2 trocitos de acero.
• 7 puntas de pipeta autómatica
• 4 tubos de ensayo de plástico.(Importante)

REACTIVOS:

• Cloruro cálcico ATPP(R2)
• Cefalina activada (R1) ATTPP
• Plasma Control Normal Coagulation.

MUESTRA :

Plasma pobre en plaquetas( PPP)

FUNDAMENTO :

Es el tiempo que tarda en coagular el PPP,tras su recalcificación y en presencia de un sustituto de f3p(cefalina ).

TÉCNICA:

• Centrifugo el plasma a 3000rpm por 10 minutos,quito el sobrenadante.
• Pongo en marcha el coagulómetro .
• Cojo dos cubetas del coagulómetro y pongo en la cubeta M 01ml de muestra y 0,1 ml de cefalina R1 y en la cubeta C 0,1 ml de R2 y cefalina R1 .
• A continuación pongo las cubetas en el coagulómetro y las dejo dos minutos.
• Cuando el contador está a cero pongo la muestra en donde el tapón rojo la tapo y le añado por el agujero del tapón rojo 0,1 ml de CaCl2 sin llegar a tocar este y cuando pare de contar miro la lectura.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS:

El TTPA se emplea para detectar déficit de los factores de la vía intrínseca de la coagulación y para el control de los tratamientos con anticoagulantes y en las terapias con heparina.

HOJA DE TRABAJO :

1º¿De donde se obtiene el sustituto de f3p? de cerebro de conejo 

2º ¿Cómo se llama el sustituto del f3p ? cefalina

3º¿Qué activadores de los factores de contacto se pueden utilizar ?caolin,polvo de vidrio,silice ,celite y ácido elágico.

4º¿Cuántos segundos debe superar el TTPA de la muestra al del control para ser considerado anormal ?Superior a 8 segundos.

RESULTADOS OBTENIDOS :

TTPA de la muestra :  116,6 segundos.

TTPA del control :      28,1 segundos.

Diferencia entre el TTPA de la muestra y el TTPA del control : 116-28,1 =88,5 segundos.

Cociente entre el TTPA de la muestra y el TTPA del control :116,6 /28,1 = 4,14 segundos.

VALORACIÓN DE LA MUESTRA :

A largado (Nota :la sangre de la bolsa está muy diluida )

DETERMINACIÓN DEL TEST DE HOWEL(XXXVIII)

3 / 3 /15

 MATERIAL :

• Baño de agua a 37ºC.
• rotulador.
• Micropipeta de 0,1ml
• Cronómetro.
• Gradilla.
• 4 tubos de hemolisis de vidrio.

REACTIVO:

• Cloruro cálcico 0,025 M.
•  Cloruro sódico al 85 %
• Plasma control coagulation.

MUESTRA :

Plasma Rico en Plaquetas (PRP)

FUNDAMENTO :

Es el tiempo que tarda en coagularse un PRP,obtenido a partir de una muestra de anticuagulada con citrato ,cuando se vuelve a recalcificar.

TÉCNICA :

• Centrifugo la sangre a 1000 rpm por 10 minutos (PRP)
• Tras la centrifugación se quita el sobrenadante,y se pone en un tubo de vidrioy rotulo M.
• Cojo 4 tubos y a uno lo rotulo con C y le añado 0,1 ml de plasma Control ,a otro lo rotulo con SS y le añado 0,1 de cloruro sódico y al ultimo lo rotulo Cl 2 Na con 0,1 ml.
• Meto en el baño de agua los cuatro tubos durante unos minutos menos de 5 ,si no se evapora.
• Y en el mismo baño añado al tubo M (muestra),0,1 de cloruro sodico y 0,1 de Na2 Cl.
• Y en el tubo C añado la misma cantidad de cloruro sodico y de Na2 Cl que en de la Muestra.
• Después pongo en marcha el cronometro tras haber puesto los reactivos.
• Los voy inclinando los tubos M y C a una inclinación por segundo y paro el cronometro cuando veo la muestra coagulada.

LECTURA DE LOS RESULTADOS :

Se mide el tiempo que tarda cada tubo en formar el coagulo.

Valores normales :90 y 130 segundos.

Si la muestra es normal debe coincidir con el test efectuado con el control.

HOJA DE TRABAJO :

1º¿ Qué tipo de muestra se utiliza en esta prueba ?PRP

2º¿A ué concentración está el CaCl2 empleado en este test ? 0,025 M

3º ¿Cuáles son los valores normales del test de Howell? 90-130 segundos.

4º¿Qué tratamiento puede ser controlado con este test ?el test control del tratamiento anticoagulante.

RESULTADOS OBTENIDOS :

Tiempo de que tarda en coagular la muestra : 130 segundos.

Tiempo que tarda en coagular el control : 115 segundos.

VALORACION DE LOS RESULTADOS : 

Es normal.

TIEMPO DE COAGULACIÓN

2/3 /15

 FUNDAMENTO:
Es el tiempo que tarda en generarase un coagulo en una muestra de sangre no anticoagulada .
MATERIAL :

• Lanceta.
• Tubo de ensayo  de vidrio .
• Gradilla.
• Baño de agua.                      
• Reloj.
• Algodón.

REACTIVO:

Alcohol.

TÉCNICA:

Me estimulo el dedo ,lo desinfecto y me pincho con la lanceta ,no desecho la primera gota y echo la sangre directamente por las paredes de tubo de vidrio y lo meto en el baño maría que está a 37ºC.

Pongo el cronometro y cuando se ha formado el coagulo paro el reloj y miro el tiempo transcurrido.

LECTURA DE LOS RESULTADOS :

3 MINUTOS.

Los valores normales :de 5 -10 minutos.

El estudio del tiempo de coagulación permite la detección de transtornos con la vía intriseca o con la vía común de la coagulación.Por lo tanto un alargamiento de este tiempo se da en lahemofilia,afibrinogenemia,fibrinilosis excesiva y en terapias con heparina,por esto último esta prueba puede hacerse para el control de los tratamientos heparínicos.

DETERMINACIÓN DEL TIEMPO DE HEMORRAGIA CON LA TÉCNICA DE DUKE(PRACTICA XXXVII)

2/3 /15

 FUNDAMENTO:
Es el tiempo que tarda desde que te haces una herida en la piel y   cesa la sangre de emanar es cuando se forma el trombo blanco plaquetario.

MATERIAL :

• Lanceta.
• Algodón .
• Un trozo de papel de filtro ,mejor circular.
• Cronómetro.

REACTIVO:

Alcohol etílico o Betadine.

TÉCNICA:

1º Limpio el lóbulo de la oreja con un algodón con desinfectante y dejo secar. 

2º Pincho cerca del borde inferior y pongo en marcha el cronometro .

3 ºDejo que salga la sangre sin presionar y la retiro con el papel de filtro cada cinco segundos.No se toca con el papel de filtro solo se aproxima a la gota.

4º Se va desplazando el papel ,cada vez las gotas son más pequeñas .

5ºParo el cronometro cuando ya no se mancha el papel .

LECTURA DE RESULTADOS :

Desde que he puesto el cronometro en marcha hasta que lo he parado ha transcurrido 45 segundos.

Para calcular el tiempo de hemorragia se multiplica el numero de manchas más uno por 30 segundos.

Normalmente se para la hemorragia  de 1 a 3 minutos.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS :

El tiempo de hemorragia está alargado en :las púrpuras vasculares ,en las trombopatías congénitas ,en la enfermedad de von Willebrand y en personas que han tomado aspirina.

HOJA DE TRABAJO : 

1º¿De quién es la técnica que se utiliza para determinar el tiempo de hemorragia ?Duke

2º¿Cada cuánto tiempo se recoge la gota de sangre que está presente en el lóbulo de la oreja ? 

5 segundos.

3º¿Cuál es el tiempo de hemorragia normal ?entre 1 y 3 minutos.

4º¿Qué fármaco aumenta,tras ser ingerido,el tiempo de hemorragia ?aspirina

DETERMINACIÓN DE LA VELOCIDAD DE SEDIMENTACIÓN GLOBULAR(VSG) PRACTICA XXVI

2/ 3 / 15 

               

FUNDAMENTO :

La VSG equivale a la  longitud que desciende los eritrocitos en la columna de la pipeta de vidrio ,en un espacio de tiempo.

MATERIAL:

• Pipeta desechable de vidrio.
• Reloj.
• tubo con tapón negro de goma perforable.

REACTIVOS :

• Tubo tapón negro que ya lleva citrato sódico al 3,8 %.

MUESTRA:

Sangre venosa anticoagulada  con citrato sódico (ya viene con el reactivo incluido y lleno de sangre hasta la marca que tiene el tubo ).

La muestra tiene que estar siempre libre de hemólisis.

TÉCNICA :

• Cojo el tubo con la sangre agito suavemente y le introduzco la pipeta desechable de vidrio hasta que aspire hasta  la señal de enrase 0   y la dejo a temperatura ambiente(pues a mayor temperatura asciende la VSG y a menor temperatura disminuye debido a la viscosidad de la sangre).
• La coloco en la gradilla  y tengo la precaución de que no haya vibraciones .
• Pongo el reloj con temporizador en una hora .

LECTURA DE LOS RESULTADOS :

A la primera hora se observa la zona de separación del plasma y los eritrocitos, que ha bajado 4 mm y a la segunda hora 20 mm .

Y también se puede ver el resultado de otra forma con el índice de Katz y se calcula así :

Í. de Katz= VSG 1ª H. + VSG 2ªH./2      /  2

Í. de Katz = 4 mm +  20 mm /2      /    2= 4 mm x 10 / 2  = 20 mm

• Los valores normales de VSG son : 

VSG                   1ª   hora                    2ª hora

__________________________________________

Varones               2-7mm                     8-15mm

Mujeres                  3-10mm                   12-20 mm

• Valores normales del índice de Kart entre 2 y 16.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS :

La VSG varia,en ciertas casos,pues en la mujer es más alta ,en la vejez y a partir del tercer mes del embarazo.

Cuando el VSG está aumentado se da en neoplasias malignas plasmáticas.Y disminuye en las hepatopatías graves.

HOJA DE TRABAJO :

1º ¿Cómo se llama la carga electrostática negativa de los globulos rojos ? potencial zeta.

2º ¿Qué anticoagulante es el más apropiado para realizar una determinación de VSG?citrato sódico 3,8%

3º¿A qué temperatura se recomienda practicar la determinación de VSG?20-25 ºC

4º ¿ué ocurre si la pipeta de VSG está inclinada durante la determinación ?Hace que aumente el resultado.

5º¿A qué tiempos se efectúa la lectura de la VSG ? la 1ª hora y a la 2ª

6º¿En qué circunstancias fisiológicas aumenta la VGS? es más alta en las mujeres y aumenta en la vejez y a partir del tercer mes del embarazo.

PRUEBA DE LA SACAROSA (PRÁCTICA XXV)

27/2/15

FUNDAMENTO
Consiste en situar los hematíes problema en un medio de baja fuerza ionica (ej: solución de sacarosa). Los hematíes tienden a fijar el complemento, por lo que los glóbulos rojos presentes en la muestra tienen una sensibilidad anormalmente alta al complemento tienden a sufrir la acción de liarse.

MATERIAL:

• 6 tubos de centrifuga.
• 3 cubetas de espectrofotómetro.
• Pipetas Pasteur.
• Pipetas graduadas (1 de 5 ml, 2 de 2 ml y 3 de 0.5ml)
• Una pipeta automática de 0.1 ml (100ul)
• Puntas de pipeta automática.
• Reloj.
• Centrifuga.
• Espectrofotómetro.
• Rotulador.
• Gradilla.
• Bata, guantes y papel de filtro.

REACTIVOS:

• Solución acuosa de sacarosa (azúcar común) a una concentración de 9.24%.
• Sangre control. Debe de ser extraída recientemente.
• Solución acuosa de amoniaco a una concentración de 0.04%.
• Suero fisiológico (0.9%)

MUESTRA:

• Sangre venosa anticoagulada (reciente).
• Sangre problema.

TÉCNICA:

1º .Rotulo 3 tubos. Uno con SF (suero fisiológico) , otro con SC (sangre control) y otro con SP (sangre problema).
2º. Relleno los tubos, de la siguiente forma:

                                Tubo SF                            Tubo SC                           Tubo SP
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Suero fisiológico
     (ml)                          1.8                              

Solución de sacarosa
        (ml)                                                               1.8                                  1.8

Sangre control
      (ml)                                                                 0.2

Sangre problema
      (ml)                          0.2                                                                         0.2


3º. Agitar, suavemente los tubos.
4º. Dejo los tubos en reposo, a temperatura ambiente por 30 minutos.
5º. Centrifugo a 2.000rpm por 5 minutos.

Nota=en el examen cojo dos muestras de sangre diferentes(una control y otra problema )







LECTURA DE RESULTADOS:
Puede ser visual o espectrofotométrica.
Visualmente cuando no se ve un botón sedimentario rojizo y un sobrenadante incoloro y trasparente no hay hemolisis. Pero si hay hemolisis se ve un liquido rojizo y trasparente. En los tubos SF y SC no tiene que haber hemolisis ya que estos funcionan como controles negativos.
Espectrofotometrica requiere la preparación de 3 tubos: tubo blanco (TB, tubo patrón (TPa) y tubo problema (TPr). Se prepara como en el siguiente cuadro:

                                              TB                      TPr                       TPa
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Solución de amoniaco
        (ml)                                 5                            5                         5

Suero fisiológico
       (ml)                                0.3            

Sobrenadante del
tubo SP (ml)                                                         0.3

Liquido resuspendido
del tubo SF (ml)                                                                               0.3

Después de preparar estos tubos, se recoge el liquido mantenido en cada uno de ellos y se mide su absorbancia en un espectrofotometro ajustado a 540nm.
El liquido del tubo blanco es el 0 de la absorbancia en el aparato y el liquido patrón se emplea para determinar la A que corresponde al 100% de hemolisis.
Los resultados de la prueba se ofrecen en forma de tanto por ciento de hemolisis, se calcula el porcentaje con esta formula:
                                     
                  %Hemólisis = A/AM   x   100

A= Absorbancia del liquido presente en el tubo problema.
AM= Absorbancia de liquido contenido en el tubo patrón (A máxima).
 A (TPr= 0,007) / AM(TPa = 0,438)  x  100 = 1,60 % de hemólisis
INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS:

La prueba de sacarosa es positiva en la HPM. Oscila entre el 10 y un 80% de hemolisis.
Y es negativa en la diseritropoyesis congénita tipo II (HEMPAS).

HOJA DE TRABAJO:
1º. ¿Con qué solución se hemolizan los hematíes vertidos en el tubo problema?

2º. ¿A qué concentración se prepara la solución de sacarosa?9,24 %

3º. ¿Cómo se llama también la sacarosa?azúcar común

4º.¿Qué es el ACD?ácido cítrico -dextrosa.

5º. ¿Cómo se prepara el tubo blanco?Amoniaco 5 ml y suero fisiológico 0,3 ml

6º. ¿Qué porcentaje de hemólisis suele producirse, con la prueba de la sacarosa, en la sangre de la HPN? Entre  10 y 80% de hemólisis.