TÉCNICA DE LA CIANMETAHEMOGLOBINA 19 / 1 / 15

FUNDAMENTO :

Para saber la concentración de hemoglobina en sangre para poder diagnosticar anemias.Consiste en transformar la hemoglobina en cianmetahemoglobina(con el cianuro y la metahemoglobina)esta se puede medir su absorvancia en el espectrofotómetro empleando un patrón conocido.

MATERIAL :

• 5 Tubos de hemólisis.
• Espectrofotómetro.
• Bata .
• Guantes.
• Pipeta graduada de 5 ml.
• Gradilla.
• Micropipeta.

REACTIVOS :

Drabkin (lo tenemos preparado con anterioridad ).

Hemoglobin  Cal

MUESTRA:

Sangre venosa con heparina  de dos bolsas diferentes : sangre problema 1 y sangre problema 2.

DESARROLLO Y TÉCNICA :

1º Preparo el método MICRO.

Rotulo cuatro tubos de ensayo: el 1º  Blanco ,2 º Patrón,3º  muestra 1 y 4º muestra 2.Los coloco en la gradilla y le añado :

1º RT (Drabkin ) 2,5 ml a todos los tubos mencionados anteriormente .2º Calibrador (Hemoglobin Cal )solo al tubo de Patrón unos 10 uL. 3º  Al tubo que pone muestra1 le añado 10 uL de sangre problema uno y 4º le añado 10 uL de sangre problema 2.

2º Incubo la muestra a temperatura ambiente 3 minutos ajusto el espectrofotómetro y leo la absorbancia en el espectrofotómetro.

CALCULOS :

Muestra /Patrón x 15 (conc.Patrón ) = g/dL

0,221 / 0,136 x 15 = 12,68 g /dL

VALORES DE REFERENCIA :

Hombres 14-18 g /dL

Mujeres 12-16 g /dL

RESULTADO :

Dentro de la normalidad en una mujer.

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OTRA FORMA DE HACERLO:

Con patrones :

1º Patrón (15 g/dl ) = 0,136 A(absorbancia )

2º 1/2 patrón (7,5 g/dl) = 0,069 A

3º 1/4 patrón (3,75 g/dl) = 0,056 A

Sangre problema 1 = 0,177

Sangre problema 2 = 0,114 

Con estos datos hago la gráfica .

GRÁFICA :      y = 0,177 (Absorbancia )

0,177 = 0,0074 x + 0,0225

0,177-0,0225= 0,0074 x

0,154 =0,0074 x

x= 0,154/0,0074 =  20,810

X = 20,810 g/dl  (Concentración )

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y  = 0,114     (Absorbancia )

0,114 =0,0074 x + 0,0225

0,091 = 0,0074 x 

x = 0,091 /0,0074 = 12,297 g /dl    (Concentración )