PRUEBA CRUZADA MAYOR (22/05 /15)

FUNDAMENTO
Para antes de la donación,se coge suero del receptor con los hematíes del donante ,primero en medio salino y después en medio albuminoso y por último frente a suero antiglobulina de Coombs.Con este último detectaremos los anticuerpos que hayan quedado fijados a la membrana.
Es importante respetar los tiempos de incubación para evitar errores en la técnica.
MATERIAL

• Tubo de hemólisis .
• Centrifuga.
• Baño de agua.
• Pipetas Pasteur.
• Gradilla.
• Reloj.
• Bata,guantes,papel de filtro.

REACTIVOS

• Suero salino.
• Albumina bovina al 30 %.
• Suero antiglobulina de Coombs.

MUESTRA

• Suero del receptor (A2)
• Hematíes del donante (suspensión de hematíes al 5% del grupo A1).

TÉCNICA

1. En un tubo pongo 1 gota de suspensión de hematíes del donante y 2 gotas de suero receptor.
2. Mezclo y dejo a temperatura ambiente 2-3 minutos.
3. Centrifugo 1700 r.p.m por 1 minuto .
4. Leo el resultado, si  aglutina o no, cuando despego el botón de sedimento,si aglutina es incompatible y si no aglutina es compatible.
5. Añado albumina bovina al tubo 3 gotas y mezclo bien.
6. Incubo a 37º C durante 30 minutos.
7. Centrifugo a 1700 r.p.m por 1 minuto.
   
8. Leo el resultado en el medio albuminoso,no aglutina.
9. Lavo 3 veces los hematíes con solución salina para eliminar los anticuerposque no se han fijado a los eritrocitos.Retiro bien el sobrenadante del último lavado.
10. Añado al tubo 1 gota de Coombs.Mezclo bien .
11. Centrifugo a 1000 r.p.m por 2 minutos.
12. Y leo el resultado.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

La lectura se realiza resuspendiendo el botón hemático con suavidad después de cada centrifugación se mira en el microscopio a 40 x si se observa reacciones débiles (yo lo he mirado con el visualizador y no ha aglutinado en ninguna de las fases ).

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS 

Si no aglutina en ninguno de los pasos indica que son compatibles y por lo tanto puede hacerse la transfusión de sangre.

La aglutinación en cualquiera de las fases indica incompatibilidad.

Si se observa hemolisis en cualquiera de los pasos es incompatible también.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Qué se enfrenta en la prueba cruzada mayor ? suero del receptor y hematíes del donante.
2. ¿Cuándo se debe realizar la prueba cruzada menor ?cuando se enfrenta el suero del donante con los hematíes del recetor.
3. ¿ Por qué  debemos realizar la prueba en medio salino y albumininoideo ? Para detectar todos los antígenos presentes.
4. ¿Qué pone de manifiesto el suero antiglobulina de Coombs ?Para detectar los anticuerpos que hayan quedados fijados a la membrana eritrocitaria.

RESULTADOS

RESULTADOS OBTENIDOS

• En el medio salino : no aglutina.
• En el medio albuminoso :no aglutina.
• En el suero antiglobulina :no aglutina.

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

La sangre analizada es compatible.

DETERMINACIÓN RÁPIDA DE HEMOGLOBINA (21/05/15)

FUNDAMENTO

Para ver la concentración de hemoglobina  antes de una donación.
Los valores mínimos son .

• 12,5 g/dl en mujeres.
• 13,5 g/dl en los hombres.

MATERIAL

• Material de extracción de sangre capilar.
• Un vaso de precipitados de 50 ml.

REACTIVOS

• Solución de sulfato de cobre(17g de este en 100ml de agua destilada ),(solución madre ).
• Cojo 51 ml de la solución madre y le añado 49 de agua destilada.

MUESTRA

• Sangre capilar adecuadamente recogida o sangre de bolsa.

TÉCNICA

1. Cojo un vaso de precipitados y le echo 50 ml del reactivo de sulfato de cobre que ya tengo preparado.
2. Le dejo caer  una gota de sangre problema.
3. Y observo si se va al fondo o no.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Si la gota de sangre cae es porque es densa y si flota es menos densa que el sulfato de cobre. 

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS

Si la concentración de Hb es superior a 12 g/dl,la persona puede donar sangre,en casa contrario,la donación no puede ser realizada.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Cuál es el valor mínimo de hemoglobina que debe tener una mujer antes de la donación ? 12,5g/dl .
2. ¿Con qué otra solución comparamos la densidad de la sangre ?con solución de sulfato de cobre a una densidad de 1,052g/dl

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

El donante es apto

DETERMINACIÓN DE UN Du(20 /05/15)

FUNDAMENTO

El Du es un antígeno débil que no se manifiesta en las pruebas normales de determinación del Rh.Para ello cogemos hematíes problema con un suero que contiene anticuerpos D y después lo enfrentamos al suero de Coombs .Si hay antígeno Du en la superficie de los eritrocitos ,se produce la unión a los anticueros anti-D a sus receptores de membrana y en la segunda fase darán aglutinación en presencia del suero antiglobulina humana.Es una prueba de Coombs indirecta.

MATERIAL

• Tubo de centrifuga .
• Centrifuga.
• 3 Pipetas Pasteur.
• Vaso de precipitado.
• Gradilla.
• Reloj.
• Baño de agua.
• Bata,guantes y papel de filtro.

REACTIVOS

• Suero anti-D.
• Suero antiglogulina humana de conejo(suero de Coombs,frasco verde).
• Suero fisiológico.

MUESTRA

Suspensión de hematíes al 5 % del grupo O.

TÉCNICA 

• En un tubo de hemolisis pongo una gota de suero anti-D y una gota de suspensión de hematíes al 5 % del grupo O.
• Mezclo suavemente e incubo el tubo a 37ºC durante 30-45 minutos.
• Después lavo los hematíes con suero fisiológico tres veces seguidas a 1000 r.p.m. por 1 minuto.Quito el sobrenadante completamente después del último lavado.
• Le añado sobre el sedimento 1 gota de Coombs y mezclo.
• Centrifugo a 1000 r.p.m por 1 minuto.

LECTURA DE RESULTADOS

Observo si ha aglutinado despegando el coagulo con suaves golpecitos y lo observo sobre el visualizador.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

Si existe aglutinación ,el resultado es positivo.Indica que en la membrana de los hematíes hay antígeno Du,y se clasifica la sangre como Rh ositivo variante Du.

Si no aglutina se clasifica la sangre como Rh negativo.

Para evitar falsos positivos ,debemos realizar una prueba de Coombs directa con los hematíes problema.Eso nos servirá como control negativo.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Qué contiene el suero de Coombs ?suero antiglobulina humana de conejo.
2. ¿Qué se detecta con la prueba directa ?un falso positivo.
3. ¿Qué podemos detectar con la prueba indirecta?un Rh + Du (débil).
4. ¿Qué buscamos en la sangre del paciente ?antígeno Du.
5. ¿Qué ocurre si el control es positivo ? que la membrana de los hematíes del aciente hay antígeno Du.

RESULTADO OBTENIDO

NO AGLUTINA,POR LO TANTO LA SANGRE ES Rh NEGATIVO

PCR (13/05/15 )

FUNDAMENTO

Para ver que secuencia especifica de ADN tenemos cada uno o la "huella molecular del ADN"con un patrón de bandas que se obtiene con la PCR.
Este método es bueno para varias cosas :

• Para resolver asuntos de inmigración.
• En disputas de perros de pura raza y en casos de paternidad.
• En análisis forenses,los resultados se interpretan utilizando la estadística,la probabilidad y la genética de poblaciones.

PRIMERA PARTE  (Pizarra)

1º Células de la mucosa bucal ----3 ml de s.salina en tubo.

2º 1,4 ml a un eppendorf---centrifugo a 8000 r.p.m  x 5 minutos.

3º Decantar el sobrenadante con cuidado.

4º Añadimos 70 ul Matriz Instagene y resuspender.

5ºIncubar 10 minutos a 100 ºC -----enfriar a temperatura ambiente.

6º Centrifuga 13000 r.p.m  x 30 segundos.

7º Pasar 10 ul del sobrenadante a microtubo ------guardar al congelador.

MATERIAL

• Gradilla.
• Tubo de ensayo y tubo de hemólisis.
• Vaso de precipitados.
• Micropipeta de 50 ul y puntas de micropipeta.
• Centrifuga para eppendorf.
• Pipetas graduadas de 10 ml ,de5 ml y de 2ml.
• Cubeta de electroforesis y fuente de alimentación.
• Microondas. 
• Bata,guantes papel de filtro.
• Campana ultravioleta.

TÉCNICA :

1. Cojo un tubo de ensayo y le añado 3 ml de s.salino.
2. Cojo un bastoncillo  de algodón y me froto la mucosa bucal para obtener células y lo introduzco en el tubo de s. salino y lo mezclo.
3. Con una micropieta graduada paso 1,4 ml de la mezcla anterior a un eppendorf y lo centrifugo a 8000 r.p.m por  5 minutos.
4. Decantar (saco el sobrenadante con cuidado)y me quedo con el sobrenadante.
5. Le añado 70 ul de reactivo Instagen y mezclo con la punta de la micropipeta.
6. Incubo 10 minutos a 100 ºC y enfriamos a temperatura ambiente.
7. Centrifugo a 13000 r.p.m por 30 segundos.
8. Cojo 10 ul de sobrenadante y lo paso a otro eppendorf y lo rotulo con una inicial (para distinguirla el proximo día ) y se mete en el congelador.

SEGUNDA PARTE  (Pizarra )

• Tubo eppendorf con bolita: Ready to Go PCR + 18,5 ul de agua destilada +2 ul oligo 1 + 2 ul oligo 2 + 2,5 ul ADN (mezcla de ADNS ).
• Después un toque de voltex para que se mezclen .
• Y golpe de centrifuga (meter y sacar ) y seguimos con la PCR.

TÉCNICA

• Cojo un eppendorf y le añado 18,5 ul de agua destilada +2ul de oligo 1+2 ul de oligo 2(Nota =yo le he añadido 4 ul de oligo de mezclas de ADNS en vez del oligo 1 y del oligo 2 ) + 2,5 ul de la muestra de ADN de Rafa que tenia anteriormente en el congelador del día anterior y lo rotulo Rafa.

• Le he dado unos golpectitos con el dedo para mezclar y después con el vortex un golpe y luego en la centrifuga otro golpe (meter y sacar )y lo he metido al congelador para el siguiente día.

TERCERA PARTE

1. Necesito preparar un gel de agarosa:

Cojo un vidrio de reloj y peso 1,5 g de agarosa(bote tapón rosa),a continuación 10 ml de tampón TAE y lo echo en una probeta y enraso hasta 100 ml con agua destilada ,desues traspaso el líquido resultante a un vaso de precipitados y lo meto al microondas (lo meto y lo saco a menudo y le doy vueltas con ayuda de una varilla) hasta que se mezcle bien y nose vean hebras tiene que quedar como agua cristalina.

2.   Lo dejo enfriar un poco hasta unos 50ºC a temperatura ambiente y le añado  colorante Redsafe unos 5 ul ,remuevo con la varilla y la deposito después en una cubeta de electroforesis previamente sellada con cinta adhesiva,  le pongo los  peines  cuando ya está gel solidificado los retiro con cuidado y le retiro las cintas adhesivas y lo coloco sobre la cubeta grande de la electroforesis.

3 .Preparo un tampón de 1 x TAE :

En una probeta de 1000 ml ,le añado 100 ml de tampón TAE y 900 ml de agua destilada ,agito con la varilla . 

Este tampón  lo deposito en la cubeta de la electroforesis hasta la señal aproximadamente de máximo  ,queda cubierto el gel de agarosa.

4.Preparo un Tampón de carga con azul de metileno :

900 ul de glicerol + 25 mg de azul de metileno y enraso en la probeta hasta llegar 10 ml con agua destilada .

5. En el pocillo 1 se pone el tampón de carga de azul de metileno 10 ul y en 16 igual; en el pocillo 1 de la fila del medio se one 10 ul de tampón de comassie y en el 16 igual.

5.El tampón de carga comassie:(ya está preparado):
comassie + sacarosa + agua destilada.

6 .Saco del congelador mi muestra de ADN(Rafa ) y la dejo a temperatura ambiente ,mientras cojo 2 eppendorf ( a   y b)y le añado a uno 5 ul del  tampón de carga de azul de metileno+ 5 ul de ADN (a) y en el otro eppendorf 5ul del tampón de comassie + 5 ul de ADN (b) .
7.  Con la micropipeta cojo lo del eppendorf (a) y lo pongo el pocillo donde esta el cátodo negativo del extremo aproximadamente, en el pocillo nº 15 y el del (b) lo coloco en el pocillo 15 pero en la fila  del medio.

8. Se tapa la cubeta y se conecta los cables a la cubeta y a la fuente de alimentación de la electroforesis ,el cable negro para el polo negativo y el cable rojo al polo positivo( hacia donde migrará el ADN ).

9 . Se programa a 120 voltios por 30 minutos .

10 .Terminada la electroforesis se visualiza los fragmentos de ADN mediante luz ultravioleta y se hace una fotografia (con cuidado la luz ultravioleta puede dañar los ojos ).

GRÁFICAS DEL Rh 7 /5 /15

GRÁFICAS DEL GRUPO SANGUÍNEO 13 /05 /15

DETERMINACIÓN DEL FENOTIPO Y GENOTIPO DEL SISTEMA Rh 7/5/15

FUNDAMENTO

Para investigar el genotipo del sistema Rh enfrento los hematíes problema a distintos antisueros dirigidos contra los antígenos que componen el RH.Si hay se aglutinan .

MATERIAL

• Tubos de hemolisis.
• Centrifuga.
• Rotulador.
• Pipetas Pasteur desechables.
• Gradilla.

REACTIVOS

• Suero anti-D
• Suero anti-E
• Suero anti-C
• Suero anti-e
• Suero anti-c

MUESTRA

Suspensión de hematíes lavados ,al 5 % en suero fisiológico.

TÉCNICA

• Primero preparo el lavado de hematíes (que ya lo tengo preparado ).
• Rotulo 5 tubos ,cada uno con una letra D,C,E,c y e.
• A cada tubo le añado una gota del antisuero correspondiente y una gota de la suspensión de hematíes .Homogeinizo suavemente.
• Centrifugo a 1000 r.p.m por 1 minuto.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Golpeo suavemente  los tubos con el dedo medio el fondo del sedimento para despegar el coagulo y los observo en el visualizador.

Si hay aglutinación es positivo y se puede apreciar grumos rojos sobre un líquido claro.

La ausencia de aglutinación es un resultado negativo y se ve la suspensión homogénea rojiza.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS

Un resultado positivo indica la presencia del antígeno del sistema Rh buscado en ese tipo.El resultado negativo indica lo contrario.

Los cinco resultados obtenidos expresan el fenotipo de la sangre analizada y se comparan con los contenidos en la tabla de fenotipos y genotipos del sistema Rh.

Si la sangre analizada es Rh negativa (D-),se puede determinar su único genotipo posible con respecto al sistema Rh.Pero ,si la sangre es Rh + ( D +) ,existen varios genotipos posibles que dan lugar al fenotipo previamente detectado.

HOJA DE TRABAJO 

1. ¿Qué antisueros se utilizan en está técnica ?Antisueros D,E,C,e y c.
2. ¿Por qué no existe suero anti-d? Por que no hay antígeno d.
3. ¿Qué expresan los cinco resultados obtenidos ? El fenotipo de la sangre analizada.
4. Si la sangre es Rh +,¿puede determinarse exactamente su genotipo con respecto al sistema Rh ?No, porque existen varios genotipos posibles.
5. Si los resultados obtenidos son : D-, C- , E+ ,c+ y e- ; ¿cuál es el genotipo posible de esta sangre ? dcE/dce ( según Fisher-Racer ).

RESULTADOS OBTENIDOS 

TUBO                                AGLUTINACIÓN

     D                                          -                 

     C                                          +                

     E                                           +               

     c                                            +                

     e                                            +                

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

El/los genotipo/s posible/s del sistema Rh en la sangre analizada es /son : dCe/dcE     dCE/dce (según Fisher-Race )

Según Wiener = ( r Y)

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN TUBO 5 / 5/ 15

FUNDAMENTO

Intento poner de manifiesto la presencia del antígeno D en la superficie de loshematíes mediante su enfrentamiento a un suero anti -D.

MATERIAL :

• Tubos de centrifuga.
• Rotulador.
• Gradilla.
• Pipetas Pasteur (de plástico ).
• Centrifuga.
• Guantes ,bata ,papel de filtro.

REACTIVOS:

• Suero anti -D
• Albúmina bovina al 30 %.
• Suero fisiologico (0,9 %)

MUESTRA

Sangre de bolsa preparada en suspensión al 5 %

TÉCNICA :

• Cojo 2 tubos de centrifuga y la añado 0,5 ml de sangre de la bolsa problema y le añado suero salino hasta la mitad del tubo para igualarlos y lo meto en la centrifuga a 2000 r.p.m por 4 minutos.Le retiro el sobrenadante y repito la misma operacion de lavado  2 veces más.
• El sedimento que me queda cojo 5 gotas y las pongo en otro tubo y le añado 5 ml de suero salino,la homogeneizo y esta es la suspensión que necesito para analizar.
• Rotulo dos tubos de centrifuga más pequeños uno con la letra D y el otro con la letra A.
• A cada tubo le añado 1 gota de la suspensión anterior y una gota de suero anti -D en el tubo D y 1 gota de albúmina al tubo A, mezclo suavemente.
• Y centrifugo por 1 minuto a 1000 r.p.m .

LECTURA DE RESULTADOS :

Con el pulpejo del dedo anular y medio golpeo el fondo del tubo suavemente para despegar el coagulo.

Se considera aglutinación positiva si se forman grumos rojos en un líquido claro y si no se aglutina los hematiés decimos que es negativa.

El tubo de la albúmina es un control negativo y debe dar siempre ausencia de aglutinación.Si no es así el resultado la prueba no es válida .

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS .

Si el tubo D aglutina y el tubo A no, decimos que el paciente es Rh positivo.

Si no se produce aglutinación en ninguno de los tubos tengo que incubar ambos a 37ºC durante media hora.Y luego centrifugar a 1000 r.p.m por 1 minuto y observo de nuevo si hay aglutinación o no .

Si persiste la negatividad comprobaré que el paciente no posee un D u (D débil )mediante una prueba de Coombs indirecta.

Si después de todo estos pasos el resultado es la no aglutinación ,informaremos que el paciente es Rh negativo.

HOJA DE TRABAJO 

1. ¿Por qué utilizamos el control de albúmina ?para saber si la prueba es válida.
2. ¿Qué ocurre si no aparece aglutinación en el tubo D?que no es Rh positivo
3. ¿Qué decimos detectar mediante un Coombs indirecto ?que el paciente no posee un Du (débil ).
4. ¿Como se prepara la muestra problema ?Cojo 2 tubos de centrifuga y la añado 0,5 ml de sangre de la bolsa problema y le añado suero salino hasta la mitad del tubo para igualarlos y lo meto en la centrifuga a 2000 r.p.m por 4 minutos.Le retiro el sobrenadante y repito la misma operación de lavado  2 veces más.El sedimento que me queda cojo 5 gotas y las pongo en otro tubo y le añado 5 ml de suero salino,la homogeneizo y esta es la suspensión que necesito para analizar.

RESULTADOS OBTENIDOS

                                                           

                               Aglutinación         

Sección S                            +

Sección A                            -

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS

  La sangre analizada es :     Rh  negativo

DETERMINACIÓN DEL GRUPO Rh EN PORTA 4/5/15

FUNDAMENTO

Está técnica se basa en la detección del antígeno D sobre la superficie de los hematíes problema,empleando como reactivo un suero monoclonal humano que contiene anticuerpos anti-D.
Si tiene antigeno D se producirá una aglutinación que puede observarse a simple vista.

MATERIAL

• Portaobjetos.
• Pipeta Pasteur.
• Tubo de ensayo.
• Capilar con heparina(si lo hago en fresco)
• Rotulador.
• Palillos agitadores.
• Visualizador luminoso.
• Bata,guantes ,papel de filtro.

REACTIVOS.

• Suero anti -D.
• Albúmina bovina al 30 %.

MUESTRA

Sangre total anticoagulada o sangre fresca.

TÉCNICA

• Divido el porta en dos secciones con el rotulador y le rotulo en un lado S y en el otro lado una A.
• En la zona S pongo 2 gotas de suero anti-D y en la otra zona A pongo 2 gotas de albúmina.
• Después pongo una gota de sangre en cada sección y mezclo con  palillos distintos cada zona.
• Lo coloco sobre el visualizador previamente calentado pues el calor favorece la aglutinación y con suaves movimientos de balanceo, por 2 minutos hasta ver si aglutina o no.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Espero 2 minutos para dar el resultado de la prueba.

Aglutinación positiva :aparece grumos rojos sobre fondo claro.No debe confundirse con pequeños coagulos de fibrina presentes en la muestra.

Aglutinación negativa:la mezcla no se aglutina queda homogénea los hematíes.

La mezcla de sangre con albúmina bovina debe dar siempre aglutinación negativa.Y si no es así,no podemos informar del resultado de la prueba.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS

 LOS RESULTADOS SE INTERPRETAN SEGÚN EL SIGUIENTE CUADRO :

Sección S                   Sección A                    Interpretación             

          +                             -                            Rh positivo

          -                              -                            Rh negativo

          +                             +                                 ¿?

+ = Aglutinación positiva
-= Aglutinación negativa
¿? = No se puede interpretar.
Para determinar un Rh negativo es necesario realizar la prueba en tubo.
HOJA DE TRABAJO :

1. ¿Qué tipo de muestra empleamos en esta técnica ? sangre total anticoagulada.
2. ¿Para qué se utiliza el visualizador ? para favorecer la mezcla de sangre y reactivos.
3. ¿Qué puede dar lugar a falsas aglutinaciones ?  pequeños coagulos de fibrina contenidos en la muestra .
4. ¿Qué ocurre si aglutina la sección A ? que no se puede informar los resultados,esta sección debe ser  siempre negativa.

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS :
La sangre analizada es Rh positivo

PREPARACIÓN DE SUSPENSIÓN DE HEMATÍES TIPADOS(lavado de hematíes ) 24/04/15

MATERIAL

• 4 tubos de centrifuga.
• Pipetas Pasteur.
• 2 vasos de precipitados .
• Gradilla.
• Pipeta graduada de 5ml.
• Rotulador.
• Centrifuga.
• Reloj.
• Bata ,guantes y papel de filtro.
• Papel parafim.

TÉCNICA

1º Cojo un tubo cónico  y pongo 1 ml de sangre la correspondiente al grupo ABO conocido y completo son suero salino hasta la mitad más o menos del tubo. 

3º Centrifugo a 2000 r.p.m. por 4 minutos.

4º Retiro el sobrenadante.

5º Repito dos veces más  y me quedo con el sedimento. 

6º Preparo hematíes al 5 % ( 5 gotas de sedimento + 5 ml de suero salino ).
7º Esta suspensión de hematíes la paso a un frasco cuentagotas y la rotulo B  y le pongo la fecha y la coloco en el frigorífico para la práctica del próximo día.

DETERMINACIÓN SÉRICA DEL GRUPO ABO 27 /04 /15

FUNDAMENTO
El suero de una persona solo debe contener anticuerpos frente a los antigenos que no están presentes en sus propios hematíes.Por eso, al hacer reaccionar este suero con los hematíes conocidos del grupo A y del grupo B,se procucirá aglutinación al ser enfrentados con antígenos distintos a los propios hematíes.

MATERIAL

• 5 tubos de hemolisis pequeños .
• 2 tubos cónicos de hemolisis .
• Baño de agua.
• Centrifuga.
• Reloj.
• Rotulador.
• Gradilla.
• Pipetas Pasteur.
• Vasos de precipitados.
• Papel parafims.
• Bata ,guantes ,papel de filtro. 

REACTIVOS

• Hematíes del grupo A1.
• Hematiés del grupo A2.
• Hematiés del grupo  B.
• Hematiés del grupo 0.
• Hematiés de la sangre problema.

MUESTRA

Suero o plasma(el plasma lo he sacado de centrifugar la muestra 10 minutos a 3000r.p.m.y me quedo con el sobrenadante )
TÉCNICA
Para el suero:
 1ºColocar el suero problema en un baño de agua a 56 ºC para inactivar al complemento y después centrifugar 10 minutos a 3000 r.p.m y extraigo el sobrenadante.
2º Realizo una suspensión de hematíes al 5 % con suero fisiológico(ya la tengo echa anteriormente en frascos cuentagotas que está en el frigorífico ).
3ºRotulo 5 tubos de hemolisis pequeños (uno dentro de otro)como A1 ,A2,B,,0 y C.
4ºColoco 2gotas de suero inactivado en cada tubo.
5º Coloco una gota de los hematíes que se corresponden con cada letra en cada tubo menos en el tubo C que coloco el del paciente .(los del cuentagotas )
6ºAgito o mezclo y centrifugo los tubos a 1000 r.p.m por un minuto.
7ºGolpeo suavemente el fondo del tubo para resuspender y despegar el coagulo y observar la presencia de aglutinaciones .

LECTURA DE LOS RESULTADOS
Si aparecen grumos rojos flotando en un líquido claro indica que existe aglutinación.En el caso contrario ,los hematíes se resuspenden dando lugar a un líquido de color rojizo.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Que son los hematíes tipados ? ?son los que sabemos de que grupo son.
2. ¿A qué dilución empleamos los hematíes del paciente?al 5%
3. ¿Qué clase de muestra se emplea en esta técnica ? suero del paciente inactivado o plasma.
4. ¿Qué ocurre cuando el tubo C presenta aglutinación ? Que hemos cometido algún error.

RESULTADOS OBTENIDOS

NO ME HA SALIDO BIEN LA PRACTICA AGLUTINABAN TODOS LOS TUBOS.

El resultado no se puede interpretar.

DETERMINACIÓN CELULAR EN TUBO 23 /04 /15

FUNDAMENTO 

Buscar la presencia o no de aglutinación de hematíes  reaccionantes al enfrentarlos con antisueros conocidos.

MATERIAL

• Tubos de centrifuga.
• Rotulador.
• Pipetas Pasteur.
• Centrifuga.
• Gradilla.
• Bata,guantes y papel de filtro.

MUESTRA 

Sangre anticoagulada de bolsa.

REACTIVOS

• Suero anti-A
• Suero anti-B   
• Suero anti-AB 
• Suero fisilógico

TÉCNICA

1. Cojo tres tubos de centrifuga y los rotulo A, B, AB y los dejo en la gradilla.  
2. Cojo otros dos tubos de centrifuga preferible cónicos y le añado 1 ml de sangre a cada uno y le añado hasta la mitad del tubo de suero salino  y los centrifugo a 2000 r.p.m por 4 minutos y retiro el sobrenadante.
3. Cojo 2 gotas del sedimento y lo deposito en otro tubo de centrifuga y le añado 5 ml de suero salino y homogeneizo.
4. A continuación cojo los tubos que tengo rotulados A, B, AB   y le añado una gota de la suspensión anterior.
5. Después le añado a cada tubo, 2 gotas de antisuero ,anti-A al tubo A y al B antisuero-B y al AB antisuero-AB.
6. Centrifugo  los tubos A, B, AB ,a 1000 r.p.m por 1 minuto o 30 segundos a 3400 r.p.m.

LECTURA DE LOS RESULTADOS

Tras centrifugar ,golpeo suavemente el fondo de cada tubo para desprender el sedimento y  observo macroscópicamente la presencia o  ausencia de aglutinación.

Reacción negativa .Los hematíes se resuspenden homogéneamente .

Reacción positiva :Se observa un botón de hematíes que permanecen unidos una vez desprendido el sedimento.

INTERPRETACIÓN CLÍNICA DE LOS RESULTADOS OBTENIDOS 

Se realiza igual que la técnica en porta.

HOJA DE TRABAJO

1. ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis ?La aglutinación.
2. ¿A qué concentración se prepara la suspensión de hematíes problema ?Al 2% o también se puede al 4 %.
3. ¿Cómo se ve una aglutinación positiva ?Se observa un botón de hematíes .
4. ¿A qué se debe el fenómeno de Rouleaux ? al fibrinógeno, las gammaglobulinas ,el dextrano y la polivinilpirrolidona.
5. ¿Cómo pueden evitarse los falsos positivos ?Con el lavado previo de los hematíes problema .

Valoración de los resultados obtenidos

La sangre ensayada es del grupo eritrocitario :  0

DETERMINACIÓN CELULAR EN PORTA 22/04 /15

FUNDAMENTO :

Observar como se aglutinan los hematíes enfrentados a antisueros conocidos ,para determinar el grupo ABO del individuo.

MATERIAL:

• Un portaobjetos o tarjeta visualizadora de fondo blanco .
• Un rotulador de vidrio.
• Una pipeta Pasteur desechable.
• Un reloj.
• Palillos mezcladores.
• Bata,guantes ,papel de filtro.

REACTIVOS:

• Suero anti-A.
• Suero anti-B.

MUESTRA:

Sangre capilar anticuagulada o sangre fresca .

TÉCNICA:

1. Cojo un porta y lo divido en dos con el rotulador,marco una parte con la letra A y la otra con la letra B.
2. En la zona A le pongo antisuero A (bote azul ) y en la zona B antisuero B (bote amarillo ).
3. Pongo una gota de sangre al lado del antisuero y con el palillo hago circulos mezclando ambas gotas ,utilizando otro palillo diferente para la otra muestra.
4. A la misma vez hago oscilar el porta hacia adelante y hacia atras ,durante dos minutos.
5. Observo si hay aglutinación o no .

LECTURA DE RESULTADOS:

Si se observa como grumos rojos que flotan sobre un líquido claro la prueba es positiva ,en cambio si la muestra se observa como suspensión homogénea es que es negativa.

Los resultados se pueden ver casi de inmediato en unos segundos ,pero es conveniente reexaminar la reacción del anti-A al cabo de 2 minutos para comprobar que no hay ninguna reacción débil ,pues suele ocurrir en menos de 1% de las muestras analizadas.

INTERPRETACIÓN DE LOS RESULTADOS:

Hematíes y suero anti-A                Hematíes y suero anti-B            Grupo eritrocitario. 

                     +                                     -                                            A                    

                    -                                       +                                           B                      

                  +                                         +                                          AB                      

                   -                                         -                                           0                        

+ = presencia de aglutinación.

- =  ausencia de aglutinación

Si el grupo obtenido es del grupo A ,se debe ensayar de nuevo con lectina anti -A 1 y si se produce aglutinación ,la persona pertenecerá al subgrupo A1.

• Yo soy del grupo 0,porque no ha aglutinado en ambos lados, A y B.

HOJA DE TRABAJO:

1. ¿Qué tipo de técnica inmunológica se emplea en este análisis ? La aglutinación.
2. ¿Qué muestra utilizamos ? Sangre capilar.
3. ¿Cómo se ve la aglutinación positiva ?Grumos rojos que flotan sobre el líquido antisuero.
4. ¿Qué debemos hacer si el grupo obtenido es A? Reexaminar la reacción del anti -A1 al cabo de 2 minutos para comprobar que no se ha pasado por alto ninguna reacción débil.

Resultados obtenidos

• Lorena, es del grupo A ,le hemos repetido la muestra con anti -A 1 y sigue aglutinando.
• Ainoha,es del grupo 0,porque no ha aglutinado en ambos lados, A y B.
• Yo soy del grupo 0,porque no ha aglutinado en ambos lados, A y B.