DETERMINACIÓN DE HIERRO SÉRICO EN SANGRE 21/1 /15

OBJETIVO :
Para saber la cantidad de hierro que hay en la sangre.

 

MATERIAL:

• Espectrofotómetro.
• Pipeta de 5 ml 
• 4 tubos de hemólisis .
• Micropipeta 0,2 ml (punta amarilla ).
• Vaso de precipitados.
• Gradilla.
• Papel de filtro.
• Guantes.
• Rotulador permanente.
• Baño de agua.

REACTIVOS :

RT (mezcla de R1 (Tampón ) y R2( Reductor ) ).

R3 (Color ).

Agua destilada.

IRON CAL (Patrón).

MUESTRA :

Sangre venosa heparizada (bolsa ).

TÉCNICA Y DESARROLLO :

1º Cojo 4 tubos de hemólisis  y los rotulo: 1 (Blanco RT) ,2 (Patrón ) ,3( Blanco muestra) y 4 (Muestra ) y los coloco sobre la gradilla.

2º Echo RT en todos los tubos  1 ml con la pipeta .

3º Echo una gota de R3  a todos menos al Blanco muestra.

4º Echo 0,2 ml con la micropipeta (punta amarilla ) de agua destilada en el tubo de Blanco RT.

5º Echo 0,2 ml con la micropipeta de IRON CAL solo al tubo Patrón.

6º Y echo otro 0,2ml de sangre solo al tubo de la muestra.

7º Incubo la muestra 5 minutos a 37 ºC (yo lo he dejado a temperatura ambiente durante 10 minutos ).Despues lo agito con el agitador electrico y a continuación :

8º Leo las absorbancias de los tubos en el espectrofotómetro :

Tubo 1 Blanco RT : Solo para calibrar  ,se mete y se pulsa PUMB.

Tubo 2 Patrón : 0,144

Tubo 3 Blanco muestra : 1,590 

Tubo 4 Muestra : 1,595

El color es estable 30 minutos mínimo.

CALCULOS :

  Muestra - Blanco de la muestra / Patrón . 100(Conc.Patrón)= ug/dL de hierro.

1,595 -1,590 /0,144 . 100 = 3,47 ug/dL de hierro en sangre.

RESULTADO :

No es correcto por que he utilizado sangre de bolsa y no es la apropiada ya que tiene que ser sangre fresca sin hemolizar.