FÓRMULA LEUCOCITARIA (PRACTICA XXVIII)1/12 /2014.

MATERIAL:

• Microscopio.
• Bata .
• Guantes.
• Registrador automático de células también se puede usar papel y lápiz.
• 2 portas.
• Un capilar heparinizado.
• Una lanceta.
• 1 gasa.
• Alcohol.
• Papel de filtro liso.

MUESTRA:

Sangre fresca .

REACTIVO:

 Aceite de inmersión.

TÉCNICA Y DESARROLLO:

1º hacemos un frotis con el capilar de sangre dejamos secar.

2º y hacemos un papnotico rápido.

3º Dejamos secar y le añadimos una gota de aceite de inmersión.

4ºPonemos en el microscopio la extensión con el condensador alto y el diafragma abierto,enfoco con el objetivo de 10 x .

5º  Observamos una zona donde se vean los hematies y empezams a anotar en la máquina registradora ,vamos moviendo el frotis en forma de zig zag ara no repetir lo que voy anotando hasta llegar a 100 leucocitos entonces la máquina pita y le doy al tanto por ciento y me da el resultado de la muestra.

HOJA DE TRABAJO :

1º ¿Con qué objetivo se observan los leucocitos cuando se determina una fórmula leucocitaria ?10 x

2º ¿Cómo es el recorrido que se describe en la observación leucocitaria ?almenas

3º ¿Cuándo se han de observar al menos 200 leucocitos ?cuando se encuentran un mayor número de linfocitos que de neutrófilos.

4º Si de 100 leucocitos observamos,20 son linfocitos y el WBC es igual a 7000 leucocitos /mm3 de sangre,¿cuál es el número de linfofitos que hay en 1 mm3 de sangre ?     Nº TL = WBC · %TL  / 100

Nº TL= 7000  x 20  / 100 = 1400 linfofitos /1mm 3 de sangre.

RESULTADOS OBTENIDOS :

TIPO DE LEUCOCITOS                  NÚMERO ENCONTRAD0

____________________________________________________________

Neutrófilos segmentados                         18 %

Neutrófilos en cayado                              19%

Eosinófilos                                               0 %

Basófilos                                                  3%

Monocitos                                               3 %

Linfofitos                                                 54 %

DETENCCIÓN DE CUERPOS DE HEINZ(PRACTICA XXI) 27/11/2014

MATERIAL:

• Microscopio.
• Bata 
• Guantes 
• Papel de filtro liso.
• 3 pipetas Pasteur.
• Un baño de Agua.
•  2portas .
• 3 tubos de ensayo.

REACTIVOS:

Colorante Cristal Violeta ya preparado con anterioridad.

Aceite de inmersión.

MUESTRA:

Sangre fresca anticoagulada del Profesor Valentin.

TÉCNICA:

1ºPongo en un tubo de ensayo volumenes iguales de cristal violeta y sangre ,unas cinco gotas de la pipeta Pasteur de cada componente ,homogeneizamos y tapamos con papel parafilm .

2º Meto el tubo en el baño por 5 minutos a 37 ºC.

3º Saco el tubo homegeneizo .

4º Saco una gota y hago una extensión ,dejo secar.

5ºPongo la muestra en el microscopio con el objetivo de 100x y le añado una gota de aceite de inmersión.

6º Observo la muestra.

RESULTADO :

La extensión se aprecia restos o impurezas del tinte por lo cual no se ve bien ,repetimos otra vez el mismo proceso pero con el reactivo diluido al 50 % con suero fisiologico y filtrado .

Y se puede observar la extensión un poco más clara pero no puede distinguir granulaciones de color púrpura más bien parece como si observaras una piedra de granito por la forma que tiene.

HOJA DE TRABAJO :

1º ¿Cuál es el colorante usado para teñir los cuerpos de Heinz ?

Solución Cristal Violeta.

2º¿De qué color son los cuerpos de Heinz teñidos ? Púrpuras.

3º¿Dónde se localizan los cuerpos de Heinz ?En la periferia de los hematíes.

RESULTADOS OBTENIDOS :

No se han encontrado cuerpos de Heinz ,se veía granulaciones del colorante por estar mal diluido.

VALORACIÓN :

No tiene una Hb inestable ,porque no está enfermo Valentin .
Los cuerpos de Heinz salen por enfermedades congénitas o por medicamentos como por ejemplo: sulfamidas,anagesicos,...

CONTAJE DE RETICULOCITOS(Practica XVI)27/11/2014

MATERIAL:

• Microscopio.
• Bata.
• Guantes 
• Papel de filtro liso.                 
• Baño de agua.
• 3 tubos de ensayo.
• Gradilla.                                         
• 3 pipetas Pasteur.
• Papel parafilm.
• 2 portas.

REACTIVOS:

Azul cresil brillante en liquido.

Aceite de inmersión.

MUESTRA:
Sangre anticoagulada con EDTA

FUNDAMENTO Y TÉCNICA :

Con está técnica podemos observar reticulocitos teñidos en el interior de la célula de color azul intenso y según el grado de maduración presentará un reticulocito distinto,los más jovenes como ovillos densos y los más maduros gránulos escasos.Se clasifican en cuatro grupos : grado I célula joven ,grado II,grado III y grado IV célula vieja.

En una tinción supravital ,se hace mientras las células están vivas.

Cogemos tres gotas de sangre anticoagulada y la depositamos en un tubo de ensayo y tres gotas del colorante y homogeneizamos.

Lo tapamos con papel parafilm y lo meto en el baño de agua que está a 37 grados centigrados durante cinco minutos.

Pasado el tiempo volvemos a homegeinizar y tomamos una gota y hago un frotis sobre el porta.dejo secar al aire.Hacer dos frotis.

Pongo el porta el el microscopio con el objetivo de 100 x  y la añado una gota de aceite de inmersión.

OBSERVACIÖN:

Los hematíes se han teñido de color verde amarillento y los reticulocitos se aprecian tres en un campo.

Se deben contar 2000 hematíes en total y se calcula así:

%reticulocitos = nº de reticulocitos/nºde hematíes contados · 100

Hacer recuento de ambos frotis,de manera que la diferencia de ambos sea igual o menor a 5 reticulocitos.

El resultado final es la media de los dos porcentajes obtenidos.

HOJA DE TRABAJO:

1º¿Qué son los reticulocitos ?Son eritrocitos inmaduros que contienen ,un retículo formado por restos de ARN(ribosomas ),mitocondrias y otros órganulos celulares .

2º¿Qué tipo de tinción estamos utilizando ?Azul cresil brillante .

3º¿Por qué hacemos la correpción del porcentaje de reticulocitos? Se hace en base al valor hematocrito del pacienteSi hay muchos reticulocitos puede indicar cáncer o una anemia falta de hemoglobina por falta de oxigeno entonces se producen más eritrocitos.

4º ¿Qué nos expresa el IPR? Nos da un valor numérico de la estimulación hematopoyética por encima de la actividad de la linea base normal.Mayor de 3 nos indica aumento de la actividad eritropoyética medular,mientras que un IPR menor de dos indica una escasa actividad eritropoyética.

RECUENTOS CELULARES.Tema 5 del libro(EJERCICIOS DE AUTOEVALUACIÓN) 24/11/2014

1º En una cámara de recuento ¿cuánto están sobreelevadas las dos bandas laterales con respecto a la central donde está grabado el retículo?
a)0,1mm

2º¿Cómo debe ser el liquido de dilución utilizado para el recuento de hematíes?

b) Isotónico.

3º En algunos recuentos electrónicos ,a la menor dilución de la muestra de sangre se le añaden varias gotas de un reactivo que puede contener cianuro y un detergente no ionico.Este reactivo debe actuar durante unos minutos y produce :
a) una lisis de de los hematíes.

4º ¿En qué componente de un contador electrónico se cuentan ,realmente,las células sanguíneas ?

a) Dispositivo de medida.

5º ¿Cuál no es un método electrónico de recuento celular ?
b) Método de la reflexión
de la luz ultravioleta.

6º ¿Qué enzima se cuantifica,en algunos autoanalizadores hematólogicos,para clasificar a los leucocitos ?

d)Peroxidasa.

7º Cuando una cámara de recuento ,tipo Neubauer mejorada,está montada,¿qué volumen de sangre diluida hay a nivel de cinco cuados medianos contenidos en el cuadro central del tetículocito ?
 d) 0,02 mm3

RECUENTO DE HEMATÍES(PRACTICA XIII)

21/11/2014

MATERIAL :

• Una pipeta diluidora de Thoma (bolita roja ),para recuento de glóbulos rojos .
• Un tubo de goma con boquilla ,adaptable a la pipeta diluidora.
• Un cubre.
• Microscopio.
• Guantes .
• Bata.
• papel de filtro liso.
• Una cámara de recuento tipo Neubauer mejorado.

REACTIVOS:
Liquido de dilución, Hayem.
Si contiene precipitados ,antes de usarlo debe ser filtrado.

 MUESTRA:
Sangre venosa anticoagulada con EDTA.

TÉCNICA Y DESARROLLO :
1º Cojo la cámara y le paso el dedo mojado en agua por las dos  bandas laterales de la cámara y a continuación le pongo encima el cubre sobre la cámara para que se adhiera a ella.
2ºCojo la pipeta Thoma y aspiro hasta la señal de 1 (si se piensa que tiene anemia ),si me sobrepaso un poco del enrase ,lo limpio con la ayuda de un algodón tocando la punta de la pipeta .
3ºLimpio el exterior de la pipeta con un algodón y sin descender de uno aspiro el diluyente de Hayen hasta la señal de 101.
4ºDesengancho cuidadosamente la g el tubo de goma de la pipeta y lo dejo homogeneizar la mezcla  durante tres minutos para ello se sujeta los dos extremos de la pipeta y se mueve suavemente hacia arriba y hacia abajo.
5ºDesecho las tres primeras gotas y la siguiente gota la deposito entre la cámara y el cubre ,dejándola que penetre por capilaridad ,evitando que se forme burbujas o que rebose la sangre diluida por los bordes del cubre.
6ºLo dejo reposar unos minutos para que las células sedimenten.
7º Pongo la cámara en el microscopio con el objetivo de 40x y con el condensador a baja altura y mirar que la distribución de los hematies es homogénea.
8º Cuento los hematíes presentes en 80 cuadros pequeños del cuadro central.Es decir ,contando los hematíes que hay en los cuatro cuadrados medianos de las esquinas y en el centro .

RESULTADOS :


Se calcula con la siguiente formula :

RCB= H x 5 x10 x d.

RCB=recuento de hematíes (nº de hematíes por mm3 de sangre)

H= hematíes contados en cinco cuadros medianos .

D = factor de dilución (100 ) El margen de error de esta técnica es de más o menos el 20 %

INTERPRETACIÓN : 

Si disminuye el recuento de hematíes  es señal de anemia.

Se considera normal en los hombres 4,5 y 6 millones /mm 3 y en las mujeres entre 4 y los 5,5 millones /mm3

HOJA DE TRABAJO :

1º¿Qué se debe hacer si el liquido de HAYEM contiene precipitados ?Si los tiene hay que filtrarlos.

2º¿Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los cuadrados pequeños donde se han contado los hematíes ?

3º¿Cuál es el volumen de sangre diluida que hay sobre cada uno de los cuadros medianos donde se han contado los hematíes ?

4º ¿Cuál es es volumen de sangre diluida que hay sobre el cuadro central ?

5ºSi la pipeta Thomase enrasa con sangre hasta la señal de 1,¿cual es la dilución `posteriormente obtenida ?100

6ºSi la sangre se diluye a 1/200 y se cuentan 450 hematíes en 5 cuadros medianos ¿cuál es el RBC obtenido ? RBC= 450 x 5 x 10 .1/200 = 4500000 hematíes.

RESULTADOS OBTENIDOS :

Hematíes contados en 5 cuadros medianos :  450 

Factor de dilución :    200

RBC =4,5 millones /mm 3

VALORACIÓN DE LOS RESULTADOS :

Sexo de la persona a la que pertenece la sangre :

Femenino

El RBC obtenido es :  Normal

VISUALIZACIÓN DE UNA CÁMARA DE RECUENTO (PRACTICA XII)

20 /11/2014
MATERIAL :

• Microscopio.
• Una cámara de recuento de Neubauer mejorado.

PROCEDIMIENTO :

1º Observar con el microscopio el reticulo de la cámara de recuento:

• Primero,con el objetivo de pequeño aumento (4x).
• Después ,con el objetivo de mediano aumento (10x).
• Y por último,con el objetivo de gran aumento 40x ).

2ºEnfocar ,con el objetivo de 10x,uno de los cuadrados grandes situados en las cuatro esquinas del reticulo .

Contar el número de cuadros medianos contenidos en ese cuadro grande periférico :16.

Teniendo en cuenta que la longitud de de cada uno de los lados delreticuloes de 3 mm,calcular :

• La longitud de los lados de cada cuadro grande periférico : 1 mm.
• La longitud de los lados de cada uno delos cuadros medianos englobados en un cuadro grande periférico :  0,25

Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el reticulo y el cubre es de 0,1 mm,calcular el volumen de sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada,a nivel de :  

• El retículo entero :  3 x 3  x 0,1=0,9 mm3
• Un cuadro grande periférico :1  x  1 x 0,1= =01mm3
• Un cuadrado mediano incluido en un cuadro grande periférico : 0,25 x 0,25 x 0,1  = 6,25 x 10 -3

3º Enfocar ,con el objetivo de 10x,el cuadro grande central .

Contar el número de cuadros medianos contenidos en ese cuadro grande central : 5 x 5= 25 cuadros.

Contar el número de cuadros pequeños englobados en uno de esos cuadros medianos : 16 medianos.

Teniendo en cuenta que la longitud de cada uno de los lados del retículo es de 3 mm,calcular :

• La longitud de los lados del cuadro grande central :1 mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadros pequeños incluidos en el cuadro grande central : 1 : 5 = 0,2mm
• La longitud de los lados de cada uno de los cuadros pequeños contenidos en uno de eso cuadros medianos :  0,2 : 4 = =0,05 
• Teniendo en cuenta que la longitud del espacio comprendido entre el reticulo y el cubre es de o,1 mm, calcular el volumen de la sangre diluida que hay en la cámara de recuento montada,a nivel de :
• El cuadrado grande central :   1 mm x 1mm  x o,1 = 0,1 mm3
• Un cuadro mediano englobado en el cuadro grande central :  0,2mm x 0,2 mm x 0,1 =0,004 mm3
• Un cuadro pequeño incluido en uno de esos cuadros medianos :
  0,05 x 0,05  x  0,1 = 2,5 x 10 -4 mm3

TINCIÓN PANÓPTICO RÁPIDO(PRÁCTICA XI)

MATERIAL:

• Frascos de Wertheim.
• Frasco lavador.
• Cubre.
• 2 portas.
• Microscopio.
• Bata .
• Guantes.
• Papel de filtro liso.

REACTIVOS :

• Agua destilada.
• Aceite de inmersión.
• Solución nº1:Solución alcohólica de triarilmetano.
• Solución n2º : Solución tamponada de xanteno.
• Solución nº3: Solución tamponada de tiazina.

MUESTRA:

Frotis sanguineo preparado reciente (15 segundos)y  sea ha dejado secar al aire.

TÉCNICA:

1ºDestapo los tres frascos de Wertheim con sus números correlativos 1 ,2 y 3 , a continuación introduzco el porta en el frasco uno sumergiendolo 5 veces en un espacio de tiempo de un segundo cada inmersión.

2º Paso al siguiente frasco 2 y hago la misma operación anterior lo sumergo 5 veces .

3º Con el frasco 3 lo mismo que en los otros frascos .

4º Lavo con agua destilada y lo dejo secar.

5º Estando seca la muestra, le pongo el cubre  y le añado una gota de aceite de inmersión.

OBSERVACIÓN Y RESULTADO :

Coloco el porta sobre el microscopio y lo observo con el objetivo 100x.

Se aprecia un mayor colorido en la muestra con respecto a las tinciones de Giemsa y Wright.

 

HOJA DE TRABAJO:
1º¿ En qué se diferencia este método de las otras tinciones clásicas ? En que es un método de inmersión.
2º¿cuántos segundos debe sumergirse el frotis en cada una de las inmersiones ?5  segundos  (un segundo en cada inmersión ).
3º¿Cuál cree que es la solución fijadora ? La 1 ,solución alcohólica de triarilmetano.

Panoptico rapido

TINCIÓN DE GIEMSA.(Práctica 9 )6 / 11/ 2014

Material :
2portas bien limpios.
Microscopio .
Cristalizador .

Puente de tinción.
3 pipetas Pasteur
2 tubos de ensayo.
Un cubre.
Bata.
Guantes .
Papel de filtro liso.

Reactivos :

Solución colorante de Giemsa  y tampón
  pH 7,2 de Panreac.
Metanol.
Aceite de inmersión.

Muestra:

Sangre venosa anticoagulada(EDTA)

Técnica:
1º Hago un frotis sanguineo y dejamos secar según la tecnica.
2º Pongo el frotis sobre el puente de tinción  y en posición horizontal.
3º Cubro el frotis con metanol durante tres minutos .Eccurro y lo dejo secar al aire,así se fija el frotis.
4º a continuación pongo el porta sobre el puente de tinción y le añado con ayuda de la pipeta el colorante de Giemsa y tampón de ph 7,2 de Panreac y lo dejo actuar 25 minutos .
5º Pasado el tiempo escurrimos y lavamos el cubre con agua del grifo.Seguidamente lavamos con tampón ph 7,2 hasta eliminar los retos de colorante.
6º Dejo escurrir y que se seque en posición vertical.
7º Una vez seca la tinción le pongo el cubre y le pongo una gota de aceite de inmersión.

Resultado :

Los hematies se tiñen de rosa y los neutrófilos con su núcleo color azul violeta.

Hoja de trabajo :

1º¿Cuáles son los anticuagulantes más adecuados para esta técnica ?
Sangre capilar fresca o venosa anticoagulada con EDTA:
2º ¿Con qué reactivo fijamos el frotis ?Metanol.
3º ¿Cuánto tiempo debe actuar el colorante en el frotis ? 25 minutos.

PREPARACIÓN DE LA GOTA GRUESA(PRACTICA 8)

Material :
Un tubo de  sangre venosa anticoagulada.
Una pipeta Pasteur.
2 portas
2 cubetas de tinción (una con Giemsa al 3 % y otra cubeta con agua limpia )

Reactivos:

• Metanol.
• Solución colorante Giemsa al 3 %.
• Un vaso de precipitados .
• Un puente de tinción.

Técnica :

1º Colocar una gota de sangre en el porta y con el otro porta realizar una extensión y la dejamos secar.

2º En el otro extremo al lado de la extension echo tres gotas de sangre en forma de un pequeño triangulo con el vertice de este  mirando hacia el frotis y seguidamente con la ayuda de un porta por un extremo hacemos sobre las tres gotas movimientos circulares,(unos 6 movimientos) sobre ellas para lograr la desfibrinación  de la sangre.

3º Coloco el porta sobre el puente de tinción y le añado al frotis  tres gotas de metanol  para fijarlo solamente a el,  la gota gruesa no  y lo dejo unos segundos.

4º La gota gruesa se deja secar unas 24 horas  en posición horizontal y protegemos la muestra de moscas ,polvo y de calor excesivo.

5º Pasado ese tiempo ,introducimos la muestra el la cubeta de giemsa ,durante 30 a 45 minutos y protegida en ese tiempo de la luz solar.

6º Sacamos el porta de esta solución de Giemsa y la pasamos a la cubeta de agua limpia unos segundos .

7º Extraigo el porta y lo dejo secar en posición vertical.

Fundamento :

Para el estudio de parásitos del género Plasmodium hay cuatro especies que se encuentran en su fase inicial en algunas de sus etapas  en la sangre periférica y para ello se hace una extensión fina y otra gruesa en el mismo porta .

Hay que prestar atención en los hematies infectados y los parásitos que pueden haber dentro de ellos.

El paludismo se basa en el aspecto de los parasitos que pueden ser :como motas rosas o rojas en el interior de los eritrocitos (Plasmodiun Vivax y ovale );en forma de anillo ,en forma de ameboideas;conglomerados de merozoitos y gametocitos libres en plasma.

Resultados :

El recuento de los parásitos se hace con cruces y en campos de 100.






Hoja de trabajo :
1º ¿Qué colorante se utiliza para teñir la preparación de gota gruesa ?
Giemsa al 3 %
2º ¿Cómo están los hematíes en la preparación de gota gruesa ?
Están alisados.
3º ¿Con qué sustancia se fija la preparación de gota gruesa ?
Metanol.

Resultados obtenido :La muestra se ve oscura y por lo tanto no se puede apreciar nada.
Valoración de los resultados :La extensión debe ser considerada como :
No válida.

TINCIÓN DE WRIGHT (PRACTICA X)

TINCIÓN DE WRIGHT.

• Materiales:
• Cristalizador
• Frasco lavador.
• Guantes.
• 2Tubos de ensayo.
• 3 Pipeta Pasteur.
• Bata.
• Gradilla
• Capilar.
• Puente de tinción.

Reactivos :

Solución de Wirght.

Solución tampón pH 7,2 

Aceite de inmersión.

Muestra :  

Sangre venosa anticoagulada.

Tëcnica :

1º Pongo una gota de sangre en el porta y con la ayuda del otro porta ,realizo un frotis sanguineo muy fino.Lo dejo secar.

2º Coloco el porta sobre el puente de tinción  vierto 1 ml de Wright .Dejo actuar 1 minuto y despues lavo con solución tampón ph7,2 ,lo dejo escurrir y lo pongo a secar en posición vertical.

3º Preparo  un tubo de ensayo le echo 5 ml de Wright y 5 de tampón pH 7,2  ,mezclo bien y cuando este seco el porta lo cubrimos con esta mezcla durante 3 a 5 minutos  y lavo con agua del grifo.

4º A continuación vuelvo a lavarlo con el tampón .Lo dejo escurrir y secar en posición vertical.

5º  Le pongo a la muestra una gota de aceite de inmersión y lo pongo en el microscopio.

Observación:

Observo con el aumento de 100x .

Resultado :

Las células son del mismo color que las de la tinción de Giemsa.

Hoja de trabajo :
1º¿Que tipo de colorante utilizamos en esta tinción ?
Wright.
2º ¿qué sustancia empleamos como fijador ?
La misma anterior por que la solución ya lleva metanol en su composición.
3º ¿Cuánto tiempo debe estar en contacto el frotis  con el colorante  diluido ?

Un minuto .

REALIZACIÓN DE UNA EXTENSIÓN SANGUÍNEA(PRACTICA 7)

RELIZACIÓN DE UNA EXTENSIÓN SANGUÍNEA 6/11/2014.

MATERIALES :

2 portas
Pipeta Pasteur
Guantes
Bata.
Gradilla.
Tubo sanguineo.

Un rotulador de vidrio.
MUESTRA:

Sangre venosa anticoagulada.

Técnica y fundamento :

1ºCojo un porta y le echo una gota de sangre a unos dos centimetros de extremo del porta y con el otro porta difusor lo pongo un poco más adelante de la gota y lo inclino unos 45 grados hasta alcanzar la gota .
2º  Dejo que la gota se extienda ,por capilaridad y arrastro el porta hacia adelante ,con un movimiento firme ,uniforme y rapido .Este movimiento debe acabar antes de llegar al otro extremo del porta con sangre.

3º Dejar secar la extensión ,agitandola al aire como un abanico,para que sus células no se distorsionen.
4º Rotulo el nombre del enfermo ,en el porta de la extensión.

Hoja de trabajo:
1º ¿Con qué sustancia se anticoagula la sangre venosa cuando se pretende hacer una extensión ?
 Con EDTA (heparina )
.
2º ¿Cuánto tiempo puede pasar ,como máximo, desde la extracción de la sangre hasta la realización del frotis ?
3horas
3º ¿Qué ángulo debe formar el porta extensor ?45grados.
El resultado obtenido :
La extensión está bien realizada.

La valoración del resultado :
La extensión de ser dada como.....válida.